作为最广泛且最重要的蛋白质翻译后修饰之一，糖基化极大的增加了蛋白质的结构和功能，而寡聚糖也因此参与到有机体的各个阶段的生命活动中。糖蛋白的多糖分析离不开多糖的酶切释放，常见的方法有特异性酶切和化学裂解法。以链酶蛋白酶E(pronase E)为主的非特异性酶切作为一种对于多糖特异性酶切的补充的方法，加之其操作简便，反应温和，便宜的特点，越来越受到研究者的青睐。常见的非特异性酶切得到的是1-6 个氨基酸的糖肽，可用于糖基化位点的分析，而这不仅增加分析的复杂性，还降低了检测的灵敏度。本文中，我们通过增加非特异性的链酶蛋白酶E的酶量及增加酶切时间对糖蛋白进行完全酶切，得到的是仅含一个天冬酰胺的糖肽。尽管如此，因为糖肽缺少带正电的基团及其固有的亲水性，导致电喷雾电离困难而影响检测的灵敏度。为了提高检测的灵敏度，我们使用了一种带永久正电荷的试剂——TMPP-Ac-OSu 对糖肽进行衍生，并利用纳流液质联用电喷雾质谱对此衍生反应的条件进行优化，得到了最佳的衍生反应条件。通过对标准多糖衍生前后进行MALDI 分析，发现检测的灵敏度提高了10 倍以上。同时，利用这一新的方法，我们成功的分析了包括核糖核酸酶B、卵清蛋白和转铁蛋白在内的三种标准蛋白，并获得了比较好的实验结果。