【摘 要】
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目的 获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR) α1亚基N末端胞外域(ECD)蛋白诱导重症肌无力模型(EAMG).方法 用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChR α1亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b.以构建的新载体转化E.coliBL21 (DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-P
【机 构】
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解放军海军总医院神经内科 吉林大学第一医院神经内科
【出 处】
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第七届中华医学会神经病学分会全国中青年神经病学学术大会暨第十届全国神经系统感染性疾病与脑脊液细胞学学术大会
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目的 获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR) α1亚基N末端胞外域(ECD)蛋白诱导重症肌无力模型(EAMG).方法 用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChR α1亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b.以构建的新载体转化E.coliBL21 (DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-PAGE比较诱导前后蛋白表达情况.重组蛋白以N^2+亲和层析纯化.蛋白透析复性后,以ELISA法检测活性.结果 PCR产物大小为650 bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实ECD核苷酸序列正确,并正确插入载体pET16b.诱导所产生的大量包涵体蛋白经复性后正确折叠且具活性,成功免疫EAMG模型.结论 可通过原核表达获得大量正确折叠的可溶性重组人肌肉AChR α1亚基ECD蛋白诱导EAMG模型.
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目的 探讨帕金森病(PD)患者伴发很可能的快速眼动睡眠行为障碍(P-RBD)的潜在发病机制.方法 (1)连续收集就诊于北京天坛医院神经内科的225例PD患者和30例对照组;按照RBD筛查量表(RBDSQ)的评分将PD患者分为PRBD组(RBDSQ≥6分)和NPRBD组(RBDSQ＜6分).(2)检测脑脊液及血清中α-synuclein寡聚体、神经免疫炎性因子,包括白细胞介素-1β(IL-1β)、前
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目的 研究帕金森病(PD)患者伴发很可能的快速眼动睡眠行为障碍(P-RBD)的脑内铁代谢异常及神经免疫炎症机制.方法 (1)连续收集就诊于北京天坛医院神经内科的225例PD患者和31例对照组;按照RBD筛查量表(RBDSQ)的评分将PD患者分为PRBD组(RBDSQ≥6分)和NPRBD组(RBDSQ＜6分).(2)在停用治疗PD药物12小时后于空腹下采集脑脊液3mL,采用酶联免疫吸附法检测脑脊液中
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