【摘 要】
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研究目的:通过构建小鼠f-actin重组腺病毒过表达载体,在体外培养的Sox9 Creβ-catenin-/-小鼠腭突间充质中注射腺病毒,观察是否能够补救腭发生的缺陷并探讨其作用机制。研究
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研究目的:通过构建小鼠f-actin重组腺病毒过表达载体,在体外培养的Sox9 Creβ-catenin-/-小鼠腭突间充质中注射腺病毒,观察是否能够补救腭发生的缺陷并探讨其作用机制。研究方法:分别取妊娠13.5天的正常C57BL/6J小鼠(WT组)及Sox9 Creβ-catenin-/-小鼠(KO组)胚胎腭突各30对随机分为三组,每组20对。正常对照组、空白腺病毒对照组和实验组均用含血清培养基培养腭突,其中空白腺病毒对照组注射空白腺病毒,实验组注射过表达重组腺病毒。分别于E13.5、培养24小时、培养48小时和培养72小时后固定腭突并提取f-actin mRNA及蛋白,采用苏木素-伊红(HE)染色观察腭突融合情况,采用免疫荧光染色(IF)观察目的蛋白的表达情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分析f-actin mRNA和蛋白的含量。研究结果:HE染色显示,WT各组在培养72h后两侧腭突融合,形成连续的上腭,KO正常对照组和空白腺病毒对照组腭突在培养过程中几乎没有生长,始终保持双侧腭突垂直位,而实验组在培养72h后两侧腭突上抬。IF染色显示,实验组腭突间充质中f-actin的表达较对照组显著增高。。RT-PCR和Western blot检测显示,实验组f-actin mRNA和蛋白表达与对照组相比均明显增加,其差异有统计学意义(P<0.05)。研究结论:f-actin在腭突间充质中的表达上调后,Sox9 Creβ-catenin-/-胚胎腭突出现上抬,说明f-actin在调控腭上抬的过程中起重要作用。
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