基于磁分离的多重SELEX筛选海洋毒素适配体

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近年来,海洋赤潮和湖泊蓝藻爆发越来越多,由藻类产生的海洋生物毒素经食物链传递给水产动物并在其体内积累,人们因食用这些含毒水产品造成的食物中毒事件也逐渐增多。因此,对水环境中的生物毒素进行监控,检测水产品中的生物毒素,对保护人们的健康和安全是非常必要的。本研究以3种海洋生物毒素软骨藻酸(DA)、石房蛤毒素(STX)和河豚毒素(TTX)为靶标,运用一种新型的基于磁分离的多重SELEX技术同时筛选针对这3种毒素的核酸适配体。首先,采用一锅法合成磁性还原氧化石墨烯(MRGO),并对其进行透射电镜、紫外光谱、傅里叶转换红外光谱和磁强曲线表征。利用MRGO的磁分离和吸附单链寡核苷酸的特性,可在SELEX中有效分离与靶标结合的单链DNA和未结合的游离单链DNA。经过最初针对3种混合靶标的12轮筛选和随后针对单一靶标的各4轮筛选,我们获得了一些适配体候选序列,并采用荧光法对其进行分析。最终,我们得到了分别对DA、ITX和STX具有高亲和力和特异性的适配体DA-06(K_d=62.07±19.97 nM)、TTX-07(K_d=44.12±15.38 nM)和STX-41(K_d=61.44±23.18 nM),同时也得到了对DA和TTX都有亲和力的两条适配体DA-01和TTX-27。这些适配体作为可代替抗体的新型识别分子,为构建生物传感器检测海洋生物毒素提供了新的选择。
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