变应性鼻炎小鼠模型慢病毒Lenti-KCa3.1-shRNA干预研究

来源 :2015年全国鼻科年会暨第七届鼻部感染与变态反应疾病专题学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wucong520123
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目的:研究慢病毒Lenti-KCa3.1-shRNA对变应性鼻炎小鼠模型的干预作用及机制. 方法:设计shRNA靶基因序列,构建慢病毒Lenti-KCa3.1-shRNA,设计KCa3.1干扰靶点序列5 -TCATGATGGACAT CCATTA-3作为目的基因序列,采用杂乱RNA序列5 -TTCTCCGAACGTGTCACGT-3作为阴性对照序列.BALB/C品系小鼠,分为AR未干预组、AR阴性shRNA干预组、AR Lenti-KCa3.1-shRNA干预组与正常对照组,观察比较小鼠喷嚏及挠鼻次数,PAS染色法与甲苯胺蓝染色分别检测鼻黏膜组织中杯状细胞与肥大细胞浸润,免疫荧光染色检测KCa3.1通道在各组小鼠鼻黏膜组织中的表达,western blotting检测KCa3.1蛋白在各组小鼠鼻黏膜组织中的表达,real-time PCR法检测KCa3.1,MUC5AC及tryptase mRNA在各组小鼠鼻黏膜组织中的表达,采用ELISA检测各种小鼠血清OVAsIgE、组胺、LTC4及鼻腔灌洗液IL-4、IL-9与IL-17的表达. 结果:与AR未干预组或AR阴性shRNA干预组比较,Lenti-KCa3.1-shRNA干预后AR小鼠喷嚏数、挠鼻次数及鼻黏膜内浸润杯状细胞与肥大细胞数减少,血清OVAsIgE、组胺、LTC4及鼻腔灌洗液IL-4,IL-9与IL-17含量也降低,KCa3.1、MUC5AC及tryptase表达量也降低。 结论:LV-KCa3.1-shRNA可以通过抑制KCa3.1活性,导致钾离子外流降低,钙内流下降,推测小鼠鼻黏膜组织杯状细胞、肥大细胞,浆细胞、Th2、Th9及Th17细胞与炎性细胞募集浸润降低,然后杯状细胞增生减少,肥大细胞浸润减轻,接着组胺、LTC4、IL-4、IL-9及IL-17表达水平下降,导致炎症减轻,变态反应过程被抑制,从而导致小鼠鼻腔症状减轻,喷嚏频率及挠鼻次数减少,达到治疗AR的效果。
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