【摘 要】
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本实验设计合成猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要中和抗原基因(COE基因),将其克隆到植物表达载体pBAC9036中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记。用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71棵转化再生植株,进一步进行田间草甘膦抗性筛选,最后获得2个T1代转基因玉米株系,PCR分子鉴定,确认外源目的基因已成功整合到玉米基因组。间接E
【机 构】
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北京农学院 动物科学技术学院,北京102206;北京市农林科学院,北京100097 北京市农林科学
【出 处】
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第三届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛
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本实验设计合成猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要中和抗原基因(COE基因),将其克隆到植物表达载体pBAC9036中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记。用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71棵转化再生植株,进一步进行田间草甘膦抗性筛选,最后获得2个T1代转基因玉米株系,PCR分子鉴定,确认外源目的基因已成功整合到玉米基因组。间接ELISA和Western检测结果均为阳性。取表达量较高的一个,提取叶片可溶性蛋白,改下注射免疫小鼠后可产生针对PEDV的特异性抗体。以上结果表明,获得的转基因玉米表达的COE蛋白具有反应原性和免疫原性,为进一步研究PEDV-COE转基因玉米口服疫苗奠定了基础。
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