【摘 要】
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目的:为了补充当糖基仍连接在对应蛋白质上时的分析方法,优化HILIC固定相及相应方法用于分离完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型.
方法:与采用反相模式分离不同疏水性的蛋白异
【机 构】
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沃特世公司美国马萨诸塞州米尔福德沃特世科技(上海)有限公司上海201206
【出 处】
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2015年生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会
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目的:为了补充当糖基仍连接在对应蛋白质上时的分析方法,优化HILIC固定相及相应方法用于分离完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型.
方法:与采用反相模式分离不同疏水性的蛋白异构体一样,本文研究了使用酰胺键合大孔径HILIC固定相BEH Amide300(A)的HILIC模式分离具有不同亲水性的蛋白异构体,如糖基修饰位点不同的异构体.
结果:使用此HILIC技术分离出完整糖基化蛋白的不同糖型和并开发出对应的分析方法,此技术还可应用于糖基修饰位点研究.
结论:采用大孔径(300(A))酰胺键合亚乙基桥杂化颗粒固定相和开发的HILIC方法,实现了对质量范围为10～150 kDa的完整蛋白糖型的高效分离,丰富了HILIC技术在大分子分离中的应用,未来可以将HILIC与光学检测或ESI-MS相结合,对完整糖蛋白进行更为详细的表征.
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