【摘 要】
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碱性磷酸酶(ALP)是磷酸酶家族中最重要的一种水解酶,其催化蛋白质,核酸和其他小分子中的磷酸酯基团的水解.同时,在临床中发现ALP 表达异常与许多疾病的发生和发展有关.因此,探讨检测ALP 的通用性方法对于相关疾病的基础研究以及临床检验有着重要的意义.迄今为止,已有多种方法用于ALP活性的监测,包括荧光法、色谱分析法、比色法、表面增强拉曼散射、电化学和电化学发光等.末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)是
【机 构】
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生命科学技术学院,暨南大学,广州,510632
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碱性磷酸酶(ALP)是磷酸酶家族中最重要的一种水解酶,其催化蛋白质,核酸和其他小分子中的磷酸酯基团的水解.同时,在临床中发现ALP 表达异常与许多疾病的发生和发展有关.因此,探讨检测ALP 的通用性方法对于相关疾病的基础研究以及临床检验有着重要的意义.迄今为止,已有多种方法用于ALP活性的监测,包括荧光法、色谱分析法、比色法、表面增强拉曼散射、电化学和电化学发光等.末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)是许多领域中广泛使用的工具酶,其以无模板的方式在ssDNA 的3-OH 末端随机添加脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP).在这项工作中,我们基于ALP,TdT 和胸腺嘧啶-HgⅡ-胸腺嘧啶(T-Hg2+-T)结构的特征,设计了一种多功能,方便,无标记,高灵敏度的荧光增强检测方法,用于ALP 的活性检测.在ALP 存在下,ssDNA-p 的3-磷酰基末端水解成羟基,然后在含有TdT 和dTTPs 的混合溶液中的3末端羟基上加入poly-T 尾.然后,具有poly-T 尾的DNA 可以与Hg2+相互作用形成稳定的T-Hg2+-T 介导的金属DNA 双链体,这增强了SG 的荧光强度.在最佳条件下,该系统用于定量监测ALP 活性,动态范围为0-2500mUmL-1,实际检测限可低至0.025mUmL-1.并且人血清样品和MCF-7 细胞裂解物中ALP 活性的测定表现出良好的传感性能,表明其在生化研究和临床诊断中的潜在应用.同时,该系统也可以应用于TdT 和Hg2+检测.
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