【摘 要】
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[目的]检测猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达,为进一步研制PCV2亚单位疫苗奠定良好的基础.[方法]根据GenBank上已经发表的PCV2的Cap蛋白基因设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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[目的]检测猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达,为进一步研制PCV2亚单位疫苗奠定良好的基础.[方法]根据GenBank上已经发表的PCV2的Cap蛋白基因设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到1条DNA片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体上获得稳定质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后,将该基因插入表达载体pET-30a质粒中.获得重组质粒pET-30a-PCV2-Cap,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,.[结果]测序结果表明Cap基因序列大小为578 bp；重组质粒pET-30a-PCV2-Cap经IPTG诱导后表达的重组蛋白分子量为28.0 kD,经超生破碎后SDS-PAGE电泳分析表明其表达的蛋白为可溶性的.Westem —Blot分析表明,该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性.[结论]PCV2-cap蛋白能通过表达载体质粒pET30a进行可溶性表达.
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