E-选择素调控白细胞跨内皮迁移过程中内皮细胞骨架重组

来源 :中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qinyalin
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  在炎症反应发生时,白细胞粘附并穿过血管上的内皮细胞,在炎症部位发生募集。白细胞的粘附触发了内皮细胞上粘附分子P-选择素、E-选择素、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)与微丝骨架的连接,在上述信号分子的调控下,导致微丝细胞骨架的快速、动态重组,并通过肌球蛋白轻链激酶调控白细胞的跨内皮迁移,但有关E-选择素调控微丝骨架、进而调控内皮细胞重组的现象、功能和信号转导机制目前鲜有报道。本文尝试从细胞骨架动力学角度为E-选择素调控白细胞跨内皮迁移提供理论基础。采用Lifeact-GFP 转染脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),让内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)可视化。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别对HUVEC 刺激4 h 和12 h,以获得不同E-选择素表达。用磁珠分别包被E-选择素配体分子CD44 和PSGL-1 与内皮细胞上E-选择素交联,并选取HUVEC 细胞胞体、裙边、胞间连接处等不同区域进行漂白后恢复(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP),量化HUVEC 细胞上受-配体交联后不同区域F-actin 的重组的动力学过程。初步结果显示,对于不同区域,在对照组和CD44 交联组,相比胞间连接和胞体处,胞体上actin 的恢复速度最快,PSGL-1 交联组仅在LPS 刺激12 h 后,胞体动力学性质更好;对同一区域,LPS刺激4 h 后的细胞在胞体和裙边上actin 的恢复速度较快,但LPS刺激时程对胞间连接处actin 的漂白后恢复影响不大。
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