【摘 要】
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目的：西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定。方法：采用overlap PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZl31-DD/RR及tyrZ131-KK/EL,将锌指转染GFP突变的转基因293T细胞,进行锌指有效性验证。转染后细胞在荧光显微镜下观察是否出现绿色荧光,同时应用流式分析修复效率。结果：合成两对锌指,测序证实锌指序列正确。将两对锌指转染293T细胞模型72h后
【机 构】
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华南理工大学生物科学与工程学院,广州 510601 南方医科大学实验动物中心广州 510515 华
【出 处】
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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会
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目的：西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定。方法：采用overlap PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZl31-DD/RR及tyrZ131-KK/EL,将锌指转染GFP突变的转基因293T细胞,进行锌指有效性验证。转染后细胞在荧光显微镜下观察是否出现绿色荧光,同时应用流式分析修复效率。结果：合成两对锌指,测序证实锌指序列正确。将两对锌指转染293T细胞模型72h后,可见细胞开始表达绿色荧光蛋白。流式细胞分析发现锌指tyrZl31-KK/EL的修复率高达0.29%,tyrZl31-DD/RR的修复效率为0.23%。但镜下观察,前者细胞的死亡率更高。结论：锌指tyrZ131-DD/RR及tyrZ131-KK/EL均能特异性识别酪氨酸酶基因特异序列,并发生切割并在修复质粒的作用下进行修复,证实为有效锌指对。
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