【摘 要】
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目的 应用AdEasy 复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的重组腺病毒载体。方法 采用分子克隆技术,在PC3 细胞中提取RNA,利用RT—PCR 技术克隆出LSD1 基因的cDNA 编码序列,先酶切连接插入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2,获得重组质粒后将其转入含有pAdEasy-1 病毒骨架的大肠杆菌BJ5183 进行
【机 构】
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郑州大学药学院,郑州大学新药研究开发中心,河南郑州 450001
【出 处】
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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周
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目的 应用AdEasy 复制缺陷型腺病毒载体系统构建携带组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的重组腺病毒载体。方法 采用分子克隆技术,在PC3 细胞中提取RNA,利用RT—PCR 技术克隆出LSD1 基因的cDNA 编码序列,先酶切连接插入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2,获得重组质粒后将其转入含有pAdEasy-1 病毒骨架的大肠杆菌BJ5183 进行同源重组,获得重组子。经酶切鉴定后将该重组子转染入人胚胎肾细胞(HEK293 细胞),经包装后获得含有LSD1 基因的重组腺病毒。反复感染HEK293 细胞扩增病毒,用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达。结果 成功构建出含有LSD1 基因的腺病毒载体,转染后的HEK293 细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光蛋白表达,证明腺病毒载体pAd-LSD1 构建成功,通过反复转染HEK293 细胞以扩增病毒。结论成功构建LSD1 基因的腺病毒载体,可以检测LSD1 在诸多癌细胞中的表达。
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