烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)属于番茄丛矮病毒科幽影病毒属。TBTV基因组由一条正义单链RNA(+ssRNA)组成,编码4个ORF,5′端缺乏帽子结构(m7GPPPN),3′末端也没有poly(A)尾。p35(ORF1)蛋白是通过不依赖帽子翻译机制而表达,已报道的不依赖帽子翻译元件为类BTE元件。通过萤火虫荧光素酶(Fluc)载体和TBTV全长RNA的体外翻译分析,表明类BTE元件的核心组件为可能结合eIF4E的SL-I以及与5′UTR形成远距离RNA-RNA互作的SL-III B;并且其结构稳定性对于p35的不依赖帽子翻译也至关重要。TBTV 3′UTR长645nt,类BTE元件位于3724~3 838位,长约115nt,在如此冗长的3′UTR中是否存在除类BTE元件之外的翻译调控元件?通过对TBTV3′UTR区域的系列缺失实验,发现TB-D9(4 040~4 099)和,IB-D10(4 093~4 152)的缺失会明显降低p35蛋白的表达,通过Mfold预测发现4 003~4 152形成独立结构域,并且利用SHAPE技术分析发现D9和D10的突变并没有影响类BTE元件的活性结构。反式竞争实验也证实了4 003~4 152区对于p35不依赖帽子翻译的调控作用。因此,在TBTV的3′UTR还存在除类BTE元件之外的不依赖帽子翻译调控元件。利用In line-probing技术体外分析4003-4152的RNA结构,表明其包含5个发夹结构和3个假结点。此结构与TCV、CMoV以及PEMV的3′UTR区的TSS结构类似。因此,以上结果表明:TBTV的3′UTR存在类BTE元件之外的新的不依赖帽子翻译元件——TSS。