【摘 要】
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我们分离到一株新噬菌体PaP1,其宿主菌是铜绿假单胞菌PA1.透射电镜显示其拥有一个二十面体立体对称的头部和一条可收缩的尾部；头部直径为70nm,尾部长度为120 nm,属于肌尾
【机 构】
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第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆,400038
【出 处】
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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会
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我们分离到一株新噬菌体PaP1,其宿主菌是铜绿假单胞菌PA1.透射电镜显示其拥有一个二十面体立体对称的头部和一条可收缩的尾部；头部直径为70nm,尾部长度为120 nm,属于肌尾噬菌体.噬菌体PaP1的全基因组序列由454高通量测序技术获得,其基因组是一条包含91715碱基对的双链线性DNA分子,平均GC含量为49.36％,远低于宿主菌PA1基因组GC含量66.35％.噬菌体PaP1基因组中存在12个tRNA基因,没有超过50bp的直接重复.PCR和测序分析表明,噬菌体PaP1的基因组具有长度为1190 bp的末端冗余.157个开放阅读框(ORF)被确定为编码序列,且噬菌体PaP1基因组的注释信息已通过Sequin工具提交给GenBank(序列号：HQ832595).噬菌体PaP1的结构蛋白由聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)测定.我们通过实验研究发现了噬菌体PaP1基因组中存在稀有碱基的线索,并利用大肠杆菌核酸内切酶Ⅴ(EndoⅤ)作为工具来进行研究.首先使用λ-Red重组系统敲除大肠杆菌DH5α的nfi基因(编码Endo),并将重组菌株命名为DH5α.△nfi；然后用它作为宿主菌,克隆不能被含EndoⅤ的大肠杆菌DH5α所克隆的PaP1 DNA片段.结果成功克隆了之前不可克隆的片段,今后我们将对噬菌体PaP1基因组中的稀有碱基进行更加深入的研究.
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