丝状病毒核蛋白的原核表达及纯化

来源 :中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:candyyao007
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  丝状病毒(Filovirus)是单股负链RNA病毒,目前包括三个属,分别是埃博拉病毒属(Ebolavirus)、马堡病毒属(Marburgvirus)以及从西班牙蝙蝠体内发现的库瓦病毒属(Cuevavirus),其中埃博拉病毒和马堡病毒是目前最为烈性的病原体之一.非洲是丝状病毒病最重要的疫源地,丝状病毒中的绝大多数成员也都集中在非洲,除了菲律宾的雷斯顿型埃博拉和西班牙的库瓦病毒.蝙蝠被认为是丝状病毒的自然宿主,目前已经从非洲和欧洲的果蝠和食虫蝠体内通过核酸检测、血清学检测和病毒分离找到了丝状病毒的证据,在亚洲,尤其是东南亚的菲律宾、孟加拉和我国,有研究表明这些地方的蝙蝠也有不同程度的血清学阳性,并在我国找到了丝状病毒的核酸证据.为了建立不同丝状病毒的血清学检测方法,本实验通过原核表达的方式获得了马尔堡、雷斯顿型埃博拉、扎依尔型埃博拉以及另一种新型丝状病毒DH04的重组核蛋白.方法:通过PCR扩增的方法获得新型丝状病毒DH04 (D)的410aa-NP蛋白C端序列,基因合成马尔堡病毒(M)、雷斯顿型埃博拉(R)、扎依尔型埃博拉(Z)以及库瓦病毒(L)410aa-NP蛋白C端序列.将上述基因分别亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建重组表达质粒pET-28(a)-D、pET-28(a)-M、pET-28(a)-R、pET-28(a)-Z、pET-28(a)-L.
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