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为了弄清楚农药的抗性，指导新农药的创制，在E.coli AHASⅡ的一个抗性区域中引入了W464A、W464F、W464L、W4G4Q、W464Y点突变，采用的是Megaprimer PCR定点突变的方法，通过PCR电泳分析及测序鉴定，确证构建成功了这五个E.coli AHAS Ⅱ突变体。通过对E.coli AHAS Ⅱ野生型及突变体动力学性质的测定可以发现它们对于底物(pyruvate)及三种辅助因子(FAD、ThDP、Mg2+)有着截然不同的特征常数。