多重RT-PCR快速检测鉴别H5、H7和H9亚型AIV方法的建立

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whpzmfwy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
参考AIVM基因和HA基因序列,设计了四对引物,其中一对为针对不同HA亚型AIV的通用引物,另外为三对分别针对H5、H7和H9亚型AIV的特异性引物.这些引物所扩增的cDNA片段大小分别为244bp、860bp、634bp和488bp.利用这些引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以同时对AIVM基因和H5、H7、H9亚型AIVHA基因进行扩增,分别得到244bp、860bp、634bp和488bp四条cDNA扩增片断,对其它常见禽病病原无特异性扩增,结果为阴性;该多重RT-PCR对AIVRNA的最低检出量为10pg,对H5、H7和H9亚型AIVRNA的最低检出量均为100pg。
其他文献
对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究.pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同
会议
本研究采用低致病力禽流感病毒(LPAIV)H9N2亚型A/Chicken/Shanghai/10/99(SH/10/99)和A/CK/Guangxi/10/99(GX/10/99)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C小鼠,用血凝抑制试验(HI)
会议
本实验利用已制备禽流感H5亚型的单抗,通过对ELISA反应各步最佳工作条件的确定,建立了以多抗作为包被抗体,单抗作为一抗的ELISA诊断方法,对各个工作组分的工作条件作了优化,
会议
用纯化的H7亚型禽流感病毒灭活后多次免疫山羊采血分离血清制备包被抗体,以自制的H7亚型特异性单克隆抗体作为一抗,建立了检测H7亚型流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法.经实
会议
以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑
会议
本文首先对猪繁殖与呼吸综合征的症状进行了概述,然后介绍了猪繁殖与呼吸综合征的常规疫苗以及基因工程疫苗,最后介绍了我国猪繁殖与呼吸综合征现状及防制难点。
1株针对禽流感病毒的单克隆抗体标记胶体金颗粒,另一株包被于硝酸纤维素膜上,建立检测禽流感病毒的胶体金免疫层析法检测试纸条(ICS).同时应用ICS和HA试验检测尿囊液,结果当H
基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测
会议
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容
会议
将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.
会议