【摘 要】
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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,大多数结核病例呈现慢性感染状态.结核分枝杆菌细胞壁组成的复杂性是其感染宿主和免疫逃避的物质基础.蛋白质组学结果显示,分枝杆菌中存在许多甘露糖基化蛋白质,其中一些蛋白质是细胞壁蛋白.我们的前期研究结果显示,用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)异源表达结核分枝杆菌
【机 构】
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大连医科大学生物化学教研室 大连医科大学生物技术系
【出 处】
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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会
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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,大多数结核病例呈现慢性感染状态.结核分枝杆菌细胞壁组成的复杂性是其感染宿主和免疫逃避的物质基础.蛋白质组学结果显示,分枝杆菌中存在许多甘露糖基化蛋白质,其中一些蛋白质是细胞壁蛋白.我们的前期研究结果显示,用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)异源表达结核分枝杆菌细胞壁蛋白Rv1096时,Rv1096蛋白发生甘露糖基化,并且分子伴侣GroEL1与其发生互作.用PMT (polyprenol-phosphate-mannose-protein mannosyl-transferase)基因敲除菌株ΔM5447表达Rv1096蛋白时,Rv1096蛋白不发生糖基化,表明Rv1096蛋白是O-甘露糖基化蛋白.与G-和G+细菌不同的是分枝杆菌有两种GroEL分子：GroEL1和GroEL2,已知GroEL2和分子伴侣GroES形成GroEL2-GroES复合体并参与胞内蛋白质的折叠,而GroEL1的功能尚不清楚.我们推测GroEL1通过蛋白质互作参与O-甘露糖基化蛋白Rv1096的分泌及其在细胞壁上的定位.在本研究中,我们已利用DNA同源重组方法构建了groEL1基因敲除菌株ΔgroEL1,同时我们也构建了GroEL1高表达菌株Msm/groEL1.我们将把表达Rv1096及其O-糖基化位点突变体Rv1096m电转化到不同菌株,通过差速离心技术和Western blot(凝集素ConA)分析,阐明GroEL1在O-甘露糖基化蛋白表达和分泌中的作用.
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