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结核病是一种严重危害人类身体健康的呼吸道传染病。异烟肼是临床上广泛使用的一种抗结核药物之一,其性质稳定,抗菌力强,疗效高,对细胞内、外和结核杆菌均有高度选择性杀菌作用。然而,肝脏毒性是异烟肼的主要不良反应,其在体内可以代谢成肼或乙酰肼,两者均与异烟肼的肝毒性有关。因此,测定这两种物质的血药浓度具有重要的临床意义[1,3]。在我们的研究中,采用对甲基苯甲醛对肼和乙酰肼衍生化,开发了一种液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法来同时测定人体血浆中肼和乙酰肼的含量。该衍生化方法简单快速,超声反应40分钟即可。通过梯度洗脱,肼和乙酰肼的衍生物可以在10分钟内实现在C18柱上的分离。同时,采用多反应监测(MRM)模式,对肼和乙酰肼进行定量研究,用于定量分析的离子分别为m/z 237.1> 119.9 256;m/z 176.9> 117.8。人类血浆中肼的检测(LOD)和定量(LOQ)的分别是0.002和0.005 ng/ml。而乙酰肼则分别为0.03和0.05ng/ml。肼、乙酰肼的线性范围分别是是0.005-50 ng/ml;0.05-500 ng/ml。方法回收率为95.38-108.12%,相对标准偏差(RSD)在1.24-1.89%范围内。另外样品前处理中,仅需0.1毫升血浆样品可完成临床样本检测。最后,将该方法应用于临床血浆样品分析,在30个用异烟肼治疗的肺结核病人体内成功检测到肼和乙酰肼的浓度,肼、乙酰肼的浓度范围分别为0.04-1.99 ng/ml和0.06-142.43 ng/ml。结果表明,本方法简便、准确、快速,适用于人体血浆中肼类毒性小分子的测定(图1)。