【摘 要】
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目的 神经突触核蛋白-γ(SNCG)在多种肿瘤中过表达,促进肿瘤细胞增殖和迁移,增加肿瘤细胞对化疗药物的耐药性.RNAi技术已是目前生物医学研究领域中最有效的手段之一.因此,靶向SNCG的siRNA有可能成为一种非常有潜力的治疗手段,对胶质瘤的治疗具有重要意义.方法 设计并合成了5条特异针对SNCG基因的shRNA Oligo片段,将目的片段插入至慢病毒干扰载体系统中,经感受态细胞转化、PCR鉴定
【机 构】
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天津市神经创伤修复重点实验室、武警部队脑创伤与神经疾病研究所、武警后勤学院附属医院脑科医院,300162 天津;天津中医药大学,300193 天津
【出 处】
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2014全国神经损伤大会暨第三届天坛全国神经创伤学术研讨会
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目的 神经突触核蛋白-γ(SNCG)在多种肿瘤中过表达,促进肿瘤细胞增殖和迁移,增加肿瘤细胞对化疗药物的耐药性.RNAi技术已是目前生物医学研究领域中最有效的手段之一.因此,靶向SNCG的siRNA有可能成为一种非常有潜力的治疗手段,对胶质瘤的治疗具有重要意义.方法 设计并合成了5条特异针对SNCG基因的shRNA Oligo片段,将目的片段插入至慢病毒干扰载体系统中,经感受态细胞转化、PCR鉴定挑选阳性克隆测序后共转染至293T细胞包装病毒.重组慢病毒载体感染U87胶质瘤细胞,并采用实时定量RT-PCR法检测siRNA对SNCG基因表达的抑制作用,筛选出最优siRNA序列用于后续研究.通过平板克隆、流式细胞术等手段,考察SNCG基因沉默对胶质瘤细胞增殖、克隆形成及其凋亡的影响.结果 成功构建了5种特异针对SNCG基因的慢病毒干扰载体(SNCG siRNA l-5),其中重组慢病毒株SNCG siRNA3和5沉默效率最为明显.分别与阴性对照和空载体组比较,SNCG siRNA 3和5能明显下调SNCG mRNA的表达(P＜0.05),U87细胞增殖和克隆形成能力被显著抑制(P＜0.05),凋亡细胞明显增加(P＜0.05).结论 靶向SNCG的基因治疗有可能成为一种非常有潜力的治疗手段,对胶质瘤的治疗具有重要意义.
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