【摘 要】
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目的：研究外源性钙网蛋白(calreticulin,CRT)对S波段微波辐射导致心肌微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MECs)损伤及其诱导的内质网应激的影响,探讨外源性CRT对S波段微波辐射致MECs损伤的影响及其机制。方法：在原代培养的大鼠心肌MECs微波辐射模型上,以外源性CRT预孵育处理,流式细胞术检测细胞凋亡率和Western blot检测c
【机 构】
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中国人民解放军总医院病理生理研究室 北京,100853
【出 处】
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第十次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会
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目的：研究外源性钙网蛋白(calreticulin,CRT)对S波段微波辐射导致心肌微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MECs)损伤及其诱导的内质网应激的影响,探讨外源性CRT对S波段微波辐射致MECs损伤的影响及其机制。方法：在原代培养的大鼠心肌MECs微波辐射模型上,以外源性CRT预孵育处理,流式细胞术检测细胞凋亡率和Western blot检测caspase-3剪切活性以反映细胞凋亡,并检测细胞活力、LDH漏出、黏附、铺展和迁移以及鬼笔环肽-FITC荧光染色观察微丝骨架改变,反映微波辐射损伤；Western blot检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78) 和CRT表达,观察内质网应激反应；Western blot检测内质网应激凋亡相关蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及其下游凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达,观察内质网应激相关细胞凋亡途径的激活；CRT与整合素(integrin β1)免疫荧光双重标记的方法进行CRT亚细胞定位检测。结果：S波段微波辐射引起明显的MECs损伤,表现为细胞活力下降、LDH漏出、细胞凋亡、微丝骨架断裂和细胞黏附、铺展和迁移功能降低；S波段微波辐射还诱导MECs发生严重的内质网应激和内质网应激相关细胞凋亡途径的活化,表现为内质网应激分子GRP78和CRT上调,促凋亡转录因子CHOP及其下游靶分子Bax表达上调,下游抗凋亡分子Bcl-2表达下调。外源性CRT预孵育明显减轻S波段微波辐射诱导的心肌MECs损伤、内质网应激和内质网应激相关细胞凋亡途径的活化,且导致细胞膜上CRT分布增多。结论：外源性CRT通过增加细胞表面CRT抑制细胞凋亡和黏附与迁移功能降低,减轻S波段微波辐射致心肌MECs损伤,其机制涉及抑制内质网应激及其相关CHOP凋亡途径的激活和减轻微丝骨架断裂。
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