论文部分内容阅读
将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型的ｇａｇ全基因序列，克隆到杆状病毒表达栽体ｐｆａｓｔｂａｃｌ中，构建了重组质粒ｐｆａｓｔＧａｇ，利用细菌／杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒，在昆虫细胞中高效表达了ＨＩＶ－１Ｇａｇ蛋白。通过改造原核表达载体ｐＢＶ２２０和ｐＥＴ２８，构建了一种新的通用型温控原核表达载体质粒ｐＶＶ５，该载体携带ＰｒＰｌ串联温控启动子及Ｈｉｓ－Ｔａｇ纯化标签，利于目的蛋白表达与纯化。将ＨＩＶ－１ｇａｇ基因的１１４８－１８５７编码序列，分别插入到ｐＶＶ５ｂ、ｐＥＴ２８ｂ的相应点，构建了重组表达质粒ｐＥＧ１ｂ、ｐＥＧ７ｂ，二者在不同受体菌中，表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的４２℅和２８℅。利用ＩＭＡＣ金属螯合层析柱，对包涵体中的重组ｐ２４蛋白进行纯化，纯度超过８０℅；纯化后的重组蛋白可与