【摘 要】
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以甘蓝型“双低”油菜“中双4号”、“westar”为受体材料,应用floral-dip法将拟南芥cry1基因C末端(cct1)导入甘蓝型油菜中。对影响floral-dip转化甘蓝型油菜的几个因素进行了研究,发现在对初花期植株进行floral-dip转化时,转化的最佳分枝部位是主花序和1、2分枝。表面活性剂silwet-77对转化有很好的辅助渗透作用,通过不同浓度与不同处理次数的对比实验发现:0.0
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以甘蓝型“双低”油菜“中双4号”、“westar”为受体材料,应用floral-dip法将拟南芥cry1基因C末端(cct1)导入甘蓝型油菜中。对影响floral-dip转化甘蓝型油菜的几个因素进行了研究,发现在对初花期植株进行floral-dip转化时,转化的最佳分枝部位是主花序和1、2分枝。表面活性剂silwet-77对转化有很好的辅助渗透作用,通过不同浓度与不同处理次数的对比实验发现:0.05%(v/v)作用浓度转化效果最好,转化率达到了1.09%,且遗传转化稳定,高浓度(0.1%(v/v))的silwet-77对油菜结实有明显的抑制作用。7d内间隔1d连续3次浸渍处理获得的转化效果最高,多次处理对油菜的结实同样存在明显的毒害作用。不同蔗糖浓度对转化效果的影响研究发现:20%(mg/l)蔗糖对转化有明显的促进作用,考虑到高糖分对花粉的反渗作用,认为15%(mg/l)为最佳作用浓度。对卡那霉素(Km)抗性植株进行gus报告基因组织染色和目的基因PCR扩增均获得了阳性结果,并把PCR扩增的特异条带回收克隆、测序,与目的基因进行Blast比对,比对结果序列同源性达100%,说明cct1已成功转入甘蓝型油菜中。floral-dip法能很好地用于甘蓝型油菜的遗传转化。
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