产甘袖假丝酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因的克隆

来源 :第二届全国发酵工程学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:benbenwenwen
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当酵母细胞处于高渗压环境中时,甘油被诱导合成以提高其胞内渗透压,这一过程受高渗压应答途径即HOG途径的调控,GPD1基因为HOG途径的重要靶基因,高效表达使胞内3一磷酸甘油脱氢酶酶活水平提高可极大地提高甘油的产量。本研究将产甘油假丝酵母(Candidaghrerolgenesis)染色体DNA经Sau3AI部分酶解后的5 ̄10kbDNA片断与经BamHI线性化及CLAP处理过的醇母-大肠杆菌穿梭质粒YEp5l,连接,以大肠杆菌DII5α为受体,构建产甘油假丝酵母的染色体质粒基因文库。通过遗传互补法,在含50g/L氯化钠的补充培养基上筛选出15个转化子,对转化子0601进行了进一步鉴定,转化子0601所含质粒YEp0601带有YEp51的标记并可以修复Saccharvmyces cereirsiar642 菌株由于其gvd1 bpd2两基因的缺失突变而表现出的渗透压敏感性,但不能修复S.cercvisiae482菌株由于其gvd1,gvd2两基因的缺失突变而表现出的渗透压敏感性,表明已克隆出产甘油假丝酵母的胞浆3-磷酸甘油脱氢酶编码基因且此基因受IIOG途径调控。
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