【摘 要】
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目的:体外分离、培养人跟腱组织来源的肌腱干细胞(Human achilles tendon-derived stem cells,hATDSCs)并对其干细胞特性进行鉴定.在此基础上进一步研究骨形态蛋白-2(BMP-2)对hATDSCs体外成软骨分化的诱导作用.方法:无菌条件下从急性跟腱断裂患者跟腱中获取少量跟腱组织,胶原酶消化获得有核细胞.以最适密度接种,细胞贴壁呈克隆样生长,混合培养获得原代h
【机 构】
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东南大学附属中大医院;东南大学附属中大医院无锡分院 东南大学附属中大医院
【出 处】
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中国长江医学论坛——2015骨科学年会暨江苏省第十七次骨科学学术会议
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目的:体外分离、培养人跟腱组织来源的肌腱干细胞(Human achilles tendon-derived stem cells,hATDSCs)并对其干细胞特性进行鉴定.在此基础上进一步研究骨形态蛋白-2(BMP-2)对hATDSCs体外成软骨分化的诱导作用.方法:无菌条件下从急性跟腱断裂患者跟腱中获取少量跟腱组织,胶原酶消化获得有核细胞.以最适密度接种,细胞贴壁呈克隆样生长,混合培养获得原代hATDSCs(P0).体外传代培养至第三代,流式细胞检测hATDSCs(P3)表面干细胞的表达;油红O染色鉴定hATDSCs向脂肪细胞分化;茜素红染色鉴定hATDSCs向成骨细胞分化;番红O/快绿染色鉴定hATDSCs向软骨细胞分化.体外三维培养(pellet)条件下,BMP-2(100ng/ml)作用于hATDSCs 2周,pellet组织学切片,番红O/快绿染色鉴定hATDSCs向软骨细胞分化,Ⅱ型胶原免疫组化染色检测软骨细胞Ⅱ型胶原的表达;定量检测硫酸化糖胺聚糖(sulfated glycosaminoglycan,sGAG)合成的变化;以及Realtime PCR检测成软骨特异性基因(SOX9,Col Ⅱ和AGN)表达的变化.
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