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本研究建立了一种无需荧光标记的多重核酸序列分析方法——多重连接序列标签扩增(Multiplex ligation-dependent sequence-tag amplification,MLSA)结合焦磷酸测序技术。首先,针对每一个待测靶标设计两条检测探针。当待测靶标存在时,两条探针与靶标杂交形成互补双链,并通过连接反应生成一条长的连接产物。