【摘 要】
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目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默MLAA-34(单核细胞白血病抗原34)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞的生长抑制作用及可能机制.
方法
【机 构】
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西安市第四医院内科,陕西西安710004西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安710005
【出 处】
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第五届全国肿瘤诊疗新进展及新技术学术会议暨第八届中国西部肿瘤学术大会
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目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默MLAA-34(单核细胞白血病抗原34)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞的生长抑制作用及可能机制.
方法:应用蛋白质印迹法从2条针对MLAA-34基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒MLAA-34/GV115RNAi-LV＃1.实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negatire control,NC)及敲减组(knock down,KD).MALL-34/GV115-RNAi-LV#1感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测MLAA-34 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测MLAA-34蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测VCR和DNR作用后各组细胞中β-catenin、TCF4、Cyclin D1 mRNA的表达.
结果:KD组细胞中MLAA-34 mRNA的沉默效率在80％,MLAA-34蛋白的表达量明显减少.VCR及DNR作用K组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P＜0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01);β-catenin、TCF4、Cyclin D1 mRNA的表达水平明显下调(P＜0.01).
结论:靶向MLAA-34基因的RNAi慢病毒可稳定沉默MLAA-34基因的表达,可能通过抑制β-catenin/TCF4信息转导系统促进U937细胞的凋亡及对化疗药物的敏感性,提示MLAA-34可能是一个新的白血病治疗靶点.
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