【摘 要】
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利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确.SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白基因VP3,约33ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9％,
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001;新疆农业大学,新疆,乌鲁木齐,830052
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确.SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白基因VP3,约33ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9％,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应.这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。
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目的获得五指山猪内源性反转录病毒5端非编码区(5UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础.
方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源性反转录病毒(PERV-WZS)5UTR,并通过NCBI公共数据库BLASTN序列进行同源性分析,应用KEGG数据库对该转录调控区进行顺式作用元件定位分析.
结果通过RACE方法获得
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