【摘 要】
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本研究的目的是建立重型乙型肝炎病人血清HBVDNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系.方法：收集10例重型乙型肝炎病人血清,提取HBVDNA,PCR扩增HB
【机 构】
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浙江大学医学院附属笫一医院传染科,卫生部传染病重点实验室,杭州,310003
【出 处】
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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议
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本研究的目的是建立重型乙型肝炎病人血清HBVDNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系.方法：收集10例重型乙型肝炎病人血清,提取HBVDNA,PCR扩增HBV全基因.PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞中,经酶切鉴定,获得含3.2KbHBVDNA的重组克隆菌,全基因测序,分析各读码框核苷酸和氨基酸变化.结果：4例成功构建HBVDNA克隆,并完成全基因测序.其中3例在前C区发生G1896A变异,产生一个终止密码予,阻止了HBeAg的翻译;1例在X区1762、1764双位点出现突变;有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知CTL、B和T细胞的细胞表位.结论：该法可用于临床研究HBV病毒基因结构与重症乙型肝炎发病的关系,并为进一步研究其HBV基因功能奠定基础.
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