【摘 要】
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目的:观察rAAV2-hTERT病毒载体转染对犬髓核细胞生物学活性的影响.方法:常规分离犬髓核细胞,rAAV2-hTERT病毒载体以1×105v.g/cell的MOI转染犬髓核细胞.在转染后5d、10d、15d、30d及60d分别以RT-PCR、Westernbloting方法,检测髓核细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达;利用real-time PCR、Elisa法分别检测髓核细胞蛋白多糖、Ⅰ
【出 处】
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中华医学会第十四届骨科学术会议暨第七届COA国际学术大会
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目的:观察rAAV2-hTERT病毒载体转染对犬髓核细胞生物学活性的影响.
方法:常规分离犬髓核细胞,rAAV2-hTERT病毒载体以1×105v.g/cell的MOI转染犬髓核细胞.在转染后5d、10d、15d、30d及60d分别以RT-PCR、Westernbloting方法,检测髓核细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达;利用real-time PCR、Elisa法分别检测髓核细胞蛋白多糖、Ⅰ和Ⅱ胶原mRNA及蛋白表达量.以上检测均与以rAAV2-EGFP转染的髓核细胞(对照组)进行对比.
结果:rAAV2可成功转染犬髓核细胞,在转染后5d,10d,15d,30d以及60d,均可于基因和蛋白水平检测到hTERT基因在髓核细胞内的表达,而在所有观察时间点内,对照组未能检测到hTERT基因表达.RT-PCR显示在转染后的10-60d,实验组PG、COLⅡmRNA的表达量明显高于对照组细胞的mRNA表达,实验组与对照组在COLⅠmRNA表达上无明显差别;ELISA检测蛋白多糖及Ⅱ型胶原表达量提示:在转染后10d,实验组PG、COLⅡ的表达量显著增加,在转染后的10-60d,实验组髓核细胞PG、COLⅡ的表达量均明显高于对照组.
结论:使用rAAV2-hTERT病毒转染可成功实现体外培养条件下髓核细胞增殖能力及细胞外基质表达的上调,这将有可能为椎间盘退行性疾病的生物治疗提供更为理想的种子细胞选择.
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