【摘 要】
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以日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)卵巢组织为实验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框(Open reading frame,ORF),并连接至表达质粒pGEX-4T-2中.将重组表达质粒导入大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli) BL21中,
【机 构】
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集美大学水产学院,厦门中国361021 福建农林大学水产系,福州中国350002
【出 处】
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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛
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以日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)卵巢组织为实验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框(Open reading frame,ORF),并连接至表达质粒pGEX-4T-2中.将重组表达质粒导入大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli) BL21中,在30℃条件下,用终浓度为1 mmol/L的IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)诱导5h得到最佳诱导量,His亲和柱进行纯化,纯化蛋白依次于8 mol/L、6 mol/L、4 mol/L、2 mol/L、1 mol/L、0 mol/L尿素缓冲液中梯度透析,得到复性后可溶于水的重组蛋白,取冻干后的蛋白制备多克隆抗体.抗体效价达50 000,其特异性可经Western blot检测.研究结果可为日本囊对虾各组织中的组织蛋白酶B蛋白表达情况提供基础资料,并为虾蟹类基因的原核表达方法提供一定的思路.
其他文献
引言 茶花鸡以其体型小、骨细、早熟、肉质细嫩味浓而著名.2000年和2006年分别被列入“国家级畜禽品种资源保护名录”,2011年获选云南省“六大名鸡”之一.随着现代遗传学技术的发展,从分子水平上研究其种群内个体分化及遗传多样性对茶花鸡保种和选育均具有重要意义.
20世纪90年代以来，鸡胚胎体外培养方法的建立使鸡的转基因技术取得了新的进展.但由于鸡胚换壳操作难免使鸡胚出现不同程度的损坏，造成鸡胚非自然因素的死亡，同时鸡胚的换壳操作也会增加鸡胚受污染的机会，因此其孵化率极低，前人研究报道的孵化率一般为6％～9％，方法经改进后孵化率为32％.研究表明，去壳后用蛋壳膜+保鲜膜封口，种蛋孵化率为3.6％；使用医用消毒膜封口，孵化率为2.5％～5％.为了探讨影响鸡胚
引言 本研究以安卡、隐性白、河南斗鸡以及丝羽乌骨鸡为研究对象，测定4个鸡种115个个体mtDNA D-loop区全长序列，分析品种间、品种内遗传多态性特点以及遗传距离，为进一步探讨线粒体DNA条形码在家禽品种鉴定方面的可行性和有效性提供依据。
本研究根据普通牛线粒体DNA序列设计引物，扩增获得了三江黄牛线粒体D-loop区全序列，并以绵羊为外属对牛亚科代表性牛种(中国家牦牛、野牦牛、九龙牦牛、瘤牛、欧洲野牛、中国水牛、亚洲水牛、德国普通牛、秦川牛、南阳牛、晋南牛、蒙古牛、平武牛、川南牛、凉山牛、湘西牛和昭通牛)的mtDNA D-loop序列进行了系统进化分析，以期了解三江黄牛的遗传多样性，且分析三江黄牛数量急剧下降的原因并提出参考意见。
中甸牦牛主要分布在海拔3 000 m以上的云南省迪庆藏族自治州，在周边的大理州高寒地区也有分布，数量以迪庆中甸县(现为香格里拉县)最多，品质较好，故名为中甸牦牛。是经牧民在长期的生产实践中不断选育而形成的中国优良畜种之一。