鸭疫里氏杆菌(RA)病是严重危害全世界养鸭业的主要细菌性传染病之一，该病给养鸭业造成了巨大的经济损失。然而，目前对RA的毒力因子和致病机理知之甚少。二肽肽酶Ⅳ(DPP Ⅳ)是多种病原菌重要的毒力因子，能够介导病原菌的粘附、降解结缔组织以及引起血管通透性的变化等，在体内外条件下RAdpp Ⅳ基因的差异表达显著，因此推测二肽肽酶Ⅳ可能是RA重要的毒力因子。本研究采用基因组步移技术分段克隆RA血清1型云梦分离株(RA-YM)dpp Ⅳ全基因，构建含壮观霉素抗性基因的pRE-LSR重组转移质粒，并转化供体菌E.coli X7213，通过接合转移和SacB负向筛选标记完成RA-YM dpp Ⅳ基因缺失突变株的构建与筛选，并利用PCR对突变株进行验证，结果表明获得了比较稳定的dpp Ⅳ基因缺失突变株，为下一步确定DPP Ⅳ是RA关键的毒力因子奠定基础以及为RA基因工程疫苗的设计与研发提供理论依据。