【摘 要】
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目的：研究自吞噬在类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(Rheumatoid Arthritis Fibroblast-like synovial cells,RA-FLS)对氨甲蝶呤(Methotrexate, MTX)凋亡诱导抵抗中的作用机制.方法： RA-FLS和骨关节炎成纤维样滑膜细胞(Osteoarthritis fibroblast-like synovial cells, OA-FLS)均
【机 构】
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西安交通大学附属红会医院 骨坏死与关节重建病区
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的：研究自吞噬在类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(Rheumatoid Arthritis Fibroblast-like synovial cells,RA-FLS)对氨甲蝶呤(Methotrexate, MTX)凋亡诱导抵抗中的作用机制.方法： RA-FLS和骨关节炎成纤维样滑膜细胞(Osteoarthritis fibroblast-like synovial cells, OA-FLS)均取材于西安市红会医院关节外科行关节置换手术的类风湿关节炎病人或骨关节炎病人的滑膜组织,所有病人均符合美国风湿病学会的诊断标准.实验用3-8代滑膜成纤维细胞,MTX的浓度梯度从0.01 μM 到1 μM,处理时间设计成24h到96h的不同时间梯度,对照组用DMSO进行处理.细胞活力及凋亡分别由MTT和流式细胞术及Western blot检测,自吞噬小体的形成由透射电子显微镜观察及免疫荧光检测,自吞噬相关因子Beclin1及LC3Ⅰ、Ⅱ和及凋亡相关因子PARPp85的蛋白水平表达用Western blot检测.用小RNA(siRNA)干扰技术干扰Beclin1的表达抑制RA-FLS自吞噬的形成.结果：与OA-FLS相比,MTX诱导RA-FLS凋亡的能力较弱；同时,MTX可诱导RA-FLS自吞噬体形成,而在OA-FLS中,此作用较较弱；转染Beclin1基因的siRNA抑制RA-FLS的自吞噬后, MTX对RA-FLS凋亡的诱导作用明显增强.结论：MTX在RA-FLS中可以诱导自吞噬的发生,而抑制自吞噬可以增强RA-FLS由MTX诱导的细胞凋亡,从而提高类风湿性关节炎对MTX的敏感性.
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