稻曲菌素A和B酶联免疫检测方法的建立

来源 :国家真菌毒素防控科技创新联盟成立大会暨第一届中国真菌毒素大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:boyhill
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稻曲病(Rice false smut)是由稻绿核菌(Villosiclava virens)侵染水稻形成的一种世界性水稻真菌病害,不仅造成水稻减产和品质的降低,还能产生为害水稻和人畜的毒素,影响水稻的生长和食用安全性.迄今,从稻绿核菌(稻曲球)中已阐明的毒素包括稻绿核菌素(Ustilaginoidins)和稻曲菌素(Ustiloxins)两大类.稻曲菌素能抑制真核生物微管蛋白组装和细胞骨架的形成,抑制水稻种子萌发、幼苗及愈伤组织生长,造成畜禽生长和生殖能力的下降以及内脏器官病变。目前针对稻曲菌素的检测分析方法主要是高效液相色谱(HPLC)法和液相色谱-质谱联用(LC-MS)法。本研究采用戊二醛法分别将稻曲菌素A和B与载体蛋白偶联免疫小鼠,通过细胞融合和有限稀释,分别获得针对稻曲菌素A和B的特异性单克隆细胞系2D3G5和1B5A10,进一步采用动物体内诱生单克隆法大量制备抗体,分别建立测定稻曲菌素A和B含量的间接竞争酶联免疫吸附法(icELISA),半抑制浓度(IC50)值分别为13.8ng/mL和18.0ng/mL,检测范围分别为2.8~72和2.5~107.4ng/mL。应用建立的icELISA方法检测从全国各地采集的稻曲球和稻谷样品中稻曲菌素A和B的含量,结果与采用HPLC方法检测的结果相符。本研究为分析样品中稻曲菌素A和B的含量建立了一种快速、低成本的有效检测方法。
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