【摘 要】
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目的:探讨薯蓣皂苷(Dio)对小鼠B16细胞是否通过提高缝隙连接细胞通讯(GJIC)功能,增强自杀基因旁杀伤效应从而对自杀基因系统协同增效.
方法:1.双荧光素示踪流式细胞仪检
【机 构】
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广州中医药大学基础医学院广州510006
【出 处】
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2016全国中医药生物化学与分子生物学年会
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目的:探讨薯蓣皂苷(Dio)对小鼠B16细胞是否通过提高缝隙连接细胞通讯(GJIC)功能,增强自杀基因旁杀伤效应从而对自杀基因系统协同增效.
方法:1.双荧光素示踪流式细胞仪检测GJIC功能;2.Realtime PCR、Western Blot法分析缝隙连接蛋白Cx26,Cx43表达水平;3.MTT法、流式细胞仪检测Dio及其联合自杀基因系统tkGFP/GCV对B16细胞的抑制率、凋亡率;4.Dio及其联合自杀基因系统对小鼠移植瘤的抑制率;5.构建突变型/野生型Cx43质粒,转染B16细胞以促进/抑制GJIC,MTT法检测Dio及其联合自杀基因系统tkGFP/GCV对B16细胞的抑制率.
结果:1.双荧光素示踪法显示Dio明显提高GJIC功能;2.Dio能提高缝隙连接蛋白Cx26,Cx43的mRNA、蛋白表达水平;3.Dio体外对tk/GCV系统有增效作用,联合组的抑制率和凋亡率明显增加,Q值大于1.15说明是协同性,红色荧光蛋白标记的tk阴性细胞凋亡增加,直观说明旁杀伤效应增强;4.Dio体内能明显抑制B16的小鼠移植瘤,与tk/GCV系统联合,抑瘤率高于Dio组和tk/GCV组;5.Dio联合tk/GCV,对转染突变型Cx43的B16,比转染野生型Cx43的B16抑制率明显下降.
结论:薯蓣皂苷体内外对小鼠黑色素瘤有明显抑制效应,联合自杀基因系统有协同增效作用,且可能是通过GJIC机制增强旁杀伤效应而发挥增效作用.
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