【摘 要】
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目的：利用分子生物学的相关技术体外合成具有良好生物学活性的Al-2信号分子,筛选与LuxS相互作用的蛋白质,为进一步研究LuxS/Al-2在变链菌和口腔生物膜的致病性、耐药性的调节机制奠定基础.方法：利用纯化表达的LuxS蛋白和Pfs蛋白体外合成Al-2信号分子,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,通过生物发光效应检测体外合成的变形链球菌Al-2信号分子的生物活性,并间接检测LuxS蛋
【机 构】
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解放军总医院口腔科;第四军医大学口腔医学院儿童口腔科 第四军医大学口腔医学院儿童口腔科
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目的：利用分子生物学的相关技术体外合成具有良好生物学活性的Al-2信号分子,筛选与LuxS相互作用的蛋白质,为进一步研究LuxS/Al-2在变链菌和口腔生物膜的致病性、耐药性的调节机制奠定基础.方法：利用纯化表达的LuxS蛋白和Pfs蛋白体外合成Al-2信号分子,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,通过生物发光效应检测体外合成的变形链球菌Al-2信号分子的生物活性,并间接检测LuxS蛋白和Pfs蛋白的生物学活性.根据NiNTA His Bind镍柱对His标签的吸附作用进行His Pull-down,筛选与LuxS相互作用的蛋白质.结果：体外合成的Al-2与变形链球菌菌液中Al-2均可诱导V.harveyi BB170发光,且体外合成Al-2诱导效果强于菌液；His-LuxS与变形链球菌菌体总蛋白进行pull-down结果显示在分子量标准31 kDa-43kDa之间存在多个能与LuxS相互作用的蛋白条带.结论：体外合成的Al-2具有良好的生物学活性,变形链球菌菌体总蛋白中存在多个能与LuxS相互作用的蛋白.
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目的：观察本课题组培育的防龋用转基因番茄中外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB是否通过花粉和根系分泌物造成基因漂移,初步探讨该转基因番茄防龋疫苗的生态安全性.方法：田间种植转基因番茄,距转基因植株的边缘0.5m、1m、3m、10m处种植非转基因对照番茄作为基因漂移的受体,开花期自由授粉,结果期在距离转基因番茄植株边缘0.5m、1m、3m、10m处,随机分别收取10株番茄果实,采集种子
目的：研究不同种属口腔细菌间的相互粘附作用对于了解口腔微生物群落的种属间作用十分重要.目前关于该课题的认知主要基于已知的可培养细菌的配对共凝集实验.本研究联合使用膜结合法和聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)系统性研究口腔细菌的相互粘附谱.材料和方法：以两种口腔细菌作为"基础菌"：已知能与多数口腔细菌粘附的具核梭杆菌以及粘附对象研究尚不多的变异链球菌."基础菌"固定于硝酸纤维膜,漂
目的：本研究使用口腔微生物DNA微阵列对封闭人群牙菌斑来源的同批少数民族儿童唾液样本进行检测,与牙菌斑微生物组成进行比较和综合分析,以全面整体地认识口腔微生物组结构的多样性、口腔微生态整体环境和龋病发生的相关性.方法：样本分别取自30个高龋儿童和20个无龋儿童(6-8岁)的唾液,唾液总DNA行16S rRNA扩增、产物标记、基因芯片杂交.结果：(1)高龋组和无龋组共50名受试者唾液样本中共检测到9
目的：龋病是在以细菌为主的多因素影响下，牙体硬组织发生慢性进行性破坏的一种疾病.牙釉质作为龋病最先侵及的组织而受到特殊的关注.氟化牙釉质用于防治早期釉质龋已有半个多世纪的历史，但是我们对氟防龋的认识还远远不够.前人对氟化牙釉质的研究大多集中在单一方面，尚未见到从氟化—脱矿—再矿化的系统分析.本研究通过建立氟化牙釉质实验、氟化牙釉质早期龋实验和氟化牙釉质早期龋的再矿化实验，对氟化牙釉质的抗龋潜力和促
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目的：研究EGCg对变异链球菌gtf基因表达及生物膜形成的影响.方法：直接购买获得实验用EGCg经直接购买获得(纯度＞95％,HPLC).通过chamber slide生物膜形成模型研究不同生长培养基中,亚抑菌浓度EGCg对变异链球菌体外形成生物膜的动态影响.通过细菌凝集实验,研究EGCg在不同生长培养基中对变异链球菌细菌凝集的影响.通过Real-time PCR检测EGCg对变异链球菌gtfB,
目的：构建由管家基因启动子启动的红色荧光蛋白报告基因穿梭表达载体,利用红色荧光蛋白发光性及强度与启动子表达的关联性,为研究管家基因启动子表达情况及变异链球菌致龋基因表达与致龋生物膜环境关系提供基础。方法： 以变异链球菌(UA159)基因组为模板,设计合成引物,PCR获取并验证目的片段；构建由目的基因启动子启动的原核表达载体pRred；通过酶切重组,构建以管家基因启动子启动的红色荧光蛋白肠杆菌-链球
目的：探讨不同能量密度HMME—PDT对致龋模型中变形链球菌的杀伤效果及其安全性的影响.方法：通过在Wistar大鼠磨牙接种变形链球菌,构建大鼠致龋模型.将56只大鼠随机分成七组：能量密度8.4J/cm2、12.6J/cm2、16.8J/cm2PDT防龋处理组、单纯光敏剂组、单纯激光组、0.2％NaF阳性对照组、0.9％生理盐水阴性对照组.选择波长532nm、功率密度140mw/cm2的半导体激光
目的：利用分子生物学的相关技术从变形链球菌基因组中钓取luxS和pfs,构建luxS与pfs基因重组质粒的亚克隆,表达与纯化LuxS和Pfs蛋白,为进一步明确QS系统在变链菌和口腔生物膜的致病性、耐药性的调节机制奠定基础。方法：提取变形链球菌UA159基因组和pET-28a,使用DNAMAN引物设计软件设计引物,通过PCR技术提取luxS和pfs后将其连入pET-28a载体,在大肠杆菌中表达并使用
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