【摘 要】
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目的：构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis，rM.S)。方法：用EcoR V和HindⅢ双酶切含HSP65-IL-2融合基因的pPRO—hsp65-IL-2载体，回收目的基因片断HSP65-IL-2，并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE2
【机 构】
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第四军医大学基础部微生物学教研室实验动物中心,西安,710032
【出 处】
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第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会
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目的：构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis，rM.S)。
方法：用EcoR V和HindⅢ双酶切含HSP65-IL-2融合基因的pPRO—hsp65-IL-2载体，回收目的基因片断HSP65-IL-2，并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后，电穿孔转化M.S感受态，潮霉素抗性压力筛选阳性rM。S.Western—blot鉴定rM.S培养上清蛋白中目的蛋白的表达。
结果：重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000bp片段，与预期大小一致。Western—blot结果表明，rM.S培养上清蛋白中有特异性反应条带，大小为78kD，与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。
结论：成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2，rM.S可特异性表达Hsp65-IL-2融合蛋白，为该rM.S用于结核新型疫苗的研究提供了基础。
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