【摘 要】
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利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了禽流感病毒感染和正常对照鸡肾组织差异表达的双向差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选到包括干扰素刺激基因(ISG12)、淋巴细胞抗原复合体基因(LY6E)、基质Gla蛋白基因(MGP)、溶菌酶基因、IFN诱导的跨膜蛋白基因及一个没有任何同源信息的EST等6个表达上调基因;KIAA125
【机 构】
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华中农业大学动物医学院,武汉,430070
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议
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利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了禽流感病毒感染和正常对照鸡肾组织差异表达的双向差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选到包括干扰素刺激基因(ISG12)、淋巴细胞抗原复合体基因(LY6E)、基质Gla蛋白基因(MGP)、溶菌酶基因、IFN诱导的跨膜蛋白基因及一个没有任何同源信息的EST等6个表达上调基因;KIAA1259、谷光苷肽转移酶基因(GST)、酒精脱氢酶基因(ADHl)、突触结合蛋白基因(SytVX)、葡萄糖6磷酸酶催化亚基基因(G6PC)、钠/二羧酸转运蛋白基因(SDCT)、MGC4504基因、MGC69686基因和一个没有任何同源信息的EST等9个表达下调基因.通过半定量RT-PCR和Northern杂交对其中8个基因的差异表达进行了验证,并利用Northern杂交对干扰素相关基因ISG12在鸡的不同组织中的表达进行了分析.试验结果初步阐明了高致病性禽流感病毒致病机制和鸡的抗病毒机制.
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以Fluo-3/AM为Ca2+指示剂,用LSCM观察缺氧对体外培养的肉鸡心肌细胞内游离Ca2+浓度的影响.结果显示,与常氧组比较缺氧显著引起心肌细胞内游离Ca2+升高(常氧99.3±13.1;缺氧129.4±24.3,p＜0.01),钙通道拮抗剂Verapamil(Ver)和Nifedipine(Nif)可显著抑制缺氧引起的游离Ca2+升高(缺氧+Ver 100.9±28.2,缺氧+Nif 107
利用RT-PCR方法扩增了肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a (+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70.以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性.以纯化的重组肉鸡HSP70免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,获得2株分泌肉鸡HSP7
本文对鹅新城疫病毒(NDV)对鸡的组织嗜性进行了研究.用3株鹅新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡,以单克隆抗体介导的免疫组化法检测攻毒鸡体内NDV抗原的分布及定位.结果发现,实验鸡多种组织器官中能检测到病毒抗原;在能检测到病毒抗原的器官中,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内.本研究结果鹅NDV强毒株对鸡是一种泛嗜性病毒.
MHC-肽四聚体技术是近年来建立的检测特异性CTL的有效方法.为了构建鸡MHC-肽四聚体,本试验克隆了莱航鸡MHC Ⅰα(B-Fα)全基因,利用软件分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-B-Fα-BSP,在大肠杆菌中得到表达,并优化了表达条件.SDS-PAGE分析表明所得融合目的蛋白约为40kD,Western-blot分析结果显示该
将纯化的重组牛朊蛋白经理化因子处理后,脑内接种金黄地鼠.临床观察200天后,对大脑、小脑和脑干,进行了蛋白酶抗性朊蛋白的Western Blot检测和朊蛋白基因表达的绝对定量.结果表明,处理的重组牛朊蛋白对金黄地鼠脑组织检测部位的基因表达有一定的影响,但是与对照组相比差异不显著;接种后在检测时间内处理重组牛朊蛋白没有导致金黄地鼠脑内酶抗性朊蛋白的出现.研究结果为重组朊蛋白的生物学提供了基础数据.
神经细胞是传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)的重要靶细胞,PrP106-126是研究TSEs致病机理的理想工具,对PrP106-126作用的培养神经细胞模型进行研究,有利于我们了解朊蛋白的功能和探讨TSEs的分子致病机制.本研究利用PrP106-126构建了大脑皮质和小脑颗粒神经元作用模型,对神经细胞的存活和朊蛋白基因的
牛、羊等家畜的吸虫病常见报道,但鹿的吸虫病却较少有报道.对新乡市人民公园23例鹿进行了诊断,其中11例患有肝片吸虫病,感染率高达48％.确诊后采取防治措施,坚持使用皮喹酮进行一年一次的普遍驱虫,加强卫生管理,使用千分之二硫酸铜溶液喷洒水内灭螺,采用硝氯酚等药物治愈以防止感染人.
利用实时荧光定量RT-PCR技术,采用GAPDH基因做内参照,对奶牛生殖系统的12个不同部位组织提取总RNA,进行PrP基因表达的定量研究.结果发现,雌雄奶牛的生殖系统各部分组织都有PrP基因表达,其中雌性奶牛的卵巢、子宫、子宫阜呈现高的表达量,雄性奶牛的睾丸、附睾呈现高的表达量.本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和生殖系统在传染性海绵状病理发生中的作用,提供了基础数据.
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2004年12月,河南省新乡县七里营镇某养猪场,在对25日龄的一窝仔猪进行猪喘气病菌苗接种后,导致接种仔猪全部猝死.后经剖检和实验室检验,诊断为该猪群隐性感染大肠杆菌病和轻度附红细胞体病后,带病预防而致应激死亡.本文介绍了发病情况、剖检变化、实验室检验、治疗。