【摘 要】
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桑黄是我国传统名贵药用真菌,本研究以分离自暴马丁香Syringa reticulate上丁香桑黄lnonotus baumii MW0801菌株为材料,利用液体发酵的手段获得发酵液,通过DEAE-Cellulose、CM-cellulose和Q-Sepharose离子交换柱层析和FPLC凝胶过滤层析(Superdex 75),获得纯化的丁香桑黄胞外漆酶(IBL).结合FPLC和SDS-PAGE凝胶
【机 构】
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北京农学院农业部都市农业(北方)重点实验室 北京 102206 中国农业大学生物学院农业生物技术国
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桑黄是我国传统名贵药用真菌,本研究以分离自暴马丁香Syringa reticulate上丁香桑黄lnonotus baumii MW0801菌株为材料,利用液体发酵的手段获得发酵液,通过DEAE-Cellulose、CM-cellulose和Q-Sepharose离子交换柱层析和FPLC凝胶过滤层析(Superdex 75),获得纯化的丁香桑黄胞外漆酶(IBL).结合FPLC和SDS-PAGE凝胶电泳结果,确定该漆酶为分子量66 kDa的单亚基蛋白,其N-末端部分氨基酸序列为AIGPVDEV(SPIN: COHJB2).酶学性质研究表明,IBL最适温度20℃、最适pH 2.4 ～ 3.2.该酶具有良好的底物多样性,其中ABTS和愈创木酚为最适底物.在pH 2.4和30℃的反应条件下,分别以ABTS和愈创木酚为底物、IBL的酶促动力学常数Km分别为1.31 mM和2.27 mM.1.25 mM-10 mM的Cu2+能够强烈促进IBL活性,酶活提高10.8-14.6倍.研究还发现,IBL具有抑制肿瘤细胞系Hep G2和L1210体外增殖的活性,半抑制剂量IC50分别为2.4 μM和3.2 μM;但不具有体外抑制HIV-1反转录酶的活性.
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