固液交替培养高效诱导棉花胚性愈伤形成与体胚发生

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以珂201、09-1及10-1等3个材料的下胚轴为外植体,建立了一种以固体-液体交替培养高效诱导体胚发生与再生植株的方法。经固体培养基诱导并增殖的非胚性愈伤组织,挑取松脆部分至MS液体培养基使其分散,经30目筛去除大颗粒后,悬浮至NH4NO3减半且KNO3加倍的MS液体培养基(激素浓度为0.5mg·L-1IBA,0.15mg·L-1kinetin)中,悬浮培养14d后,经50目筛,将筛上的非胚性愈伤组织继续悬浮培养,经2~3轮悬浮培养(继代周期为15d)获得大量状态一致的胚性愈伤组织,并接种至同成分并添加0.5g·L-1天冬酰胺、1g·L-1谷氨酰胺、30g·L-1葡萄糖、0.25%phytagel的固体培养基上。培养30d后以相同的固体培养基继代培养,挑取获得的大量体细胞胚胎后,可将余下的胚性愈伤悬浮至上述MS液体培养基继续培养。该方法有效缩短了由非胚性愈伤组织向胚性愈伤组织转化的时间,即由2~3个月缩短至30~45d。同时,该方法能得到状态相对一致的结构松散的胚性愈伤组织,经体细胞胚胎诱导同步获得大量体细胞胚胎,体细胞胚胎(包括心形胚、鱼雷形胚与子叶胚)数量是单一固体培养的4倍以上。该方法成功实现了珂201、09-1以及10-1的高效棉花胚性愈伤形成与体胚发生。本研究使棉花在组织培养过程中诱导周期短、更具高效获得胚性愈伤组织及大量体细胞胚的能力,从而在研究棉花体细胞形态建成、组织分化及植株再生方面建立了重要的技术平台。
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