【摘 要】
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目的:准确定位和高效检测猪瘟病毒RNA.方法:本研究设计合成了猪瘟病毒RNA和猪内参基因p-actin的多条特异性探针,在猪瘟病毒中等致病力毒株HeBHHI/95毒株感染PK15细胞中进行蛋白酶K浓度和甲醛固定时间的优化,建立了猪瘟病毒QuantiGeneViewRNA原位杂交检测技术.结果:在荧光共聚焦显微镜下,培养细胞中明亮的红色荧光为猪瘟病毒RNA,且病毒RNA在胞内复制的主要部位是有丰富膜
【机 构】
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湖南中岸生物药业有限公司,湖南长沙 410100;中国兽医药品监察所,北京100081 中国兽医药
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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目的:准确定位和高效检测猪瘟病毒RNA.
方法:本研究设计合成了猪瘟病毒RNA和猪内参基因p-actin的多条特异性探针,在猪瘟病毒中等致病力毒株HeBHHI/95毒株感染PK15细胞中进行蛋白酶K浓度和甲醛固定时间的优化,建立了猪瘟病毒QuantiGeneViewRNA原位杂交检测技术.
结果:在荧光共聚焦显微镜下,培养细胞中明亮的红色荧光为猪瘟病毒RNA,且病毒RNA在胞内复制的主要部位是有丰富膜系统的细胞核周围;该法检测灵敏度可达10-8,比猪瘟病毒单抗免疫荧光法及猪瘟病毒免疫组化法高3-4个数量级;同时,该法设计的探针能特异性与各种亚型的猪瘟病毒结合,与其他病毒无交叉反应.
结论:本研究建立的猪瘟病毒QuantiGene ViewRNA原位杂交检测方法具有特异性强、灵敏度高和省时的优点,为猪瘟病毒准确诊断提供一高敏感且特异的新技术,同时为猪瘟病毒RNA在体内外靶细胞中增殖和复制动态研究提供重要的技术支持.
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