【摘 要】
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针对CSFV的保守区设计并筛选出一套RT-LAMP引物,以石门株为标准毒株,采用梯度稀释法对各反应要素进行优化。最终确定CSFV RT-LAMP的反应体系为:4mM镁离子浓度,0.8 M甜菜碱,1.4 mM dNTP mix,8 U Bst DNA大片段聚合酶,2 U AMV反转录酶,5 pM F3,5 pM B3,50 pM FIP,50pM BIP,25 pM LF,25 pM LB,1×Th
【机 构】
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中国兽医药品监察所猪瘟参考实验室,北京,10081
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
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针对CSFV的保守区设计并筛选出一套RT-LAMP引物,以石门株为标准毒株,采用梯度稀释法对各反应要素进行优化。最终确定CSFV RT-LAMP的反应体系为:4mM镁离子浓度,0.8 M甜菜碱,1.4 mM dNTP mix,8 U Bst DNA大片段聚合酶,2 U AMV反转录酶,5 pM F3,5 pM B3,50 pM FIP,50pM BIP,25 pM LF,25 pM LB,1×Thermo butter,μl RNA；反应条件为63℃45min；80℃ 10min.RT-LAMP反应可在普通水浴锅或恒温箱里完成,产物经琼脂糖凝胶电泳可见大小片段不等的斑马纹样条带；反应同时产生大量白色副产物,混浊可辨,离心后沉于管底形成白色沉淀物.特异性试验及酶切鉴定证明该方法具有很好的特异性.灵敏度试验显示该方法的灵敏度比常规RT-PCR高两个数量级.
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