【摘 要】
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目的 研究建立以H2O2判定结果的96孔板细胞转化实验方法,并对植物性雌激素染料木黄酮和葛根素进行了研究.方法 1)采用细胞灶法和H2O2法分别进行实验.细胞灶组；第21天直接固定染色,计数转化灶个数.H2O2组：细胞接种后培养至第19天时,添加H2 O2处理24 h,CCK-8染色并测定A450nm值,计算细胞转化率.比较两种方法的相关性.2)通过细胞生长试验选择适宜的染料木黄酮和葛根素浓度进行
【机 构】
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中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,北京100176 罗氏研发(中国)有限公司 上海市
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目的 研究建立以H2O2判定结果的96孔板细胞转化实验方法,并对植物性雌激素染料木黄酮和葛根素进行了研究.方法 1)采用细胞灶法和H2O2法分别进行实验.细胞灶组；第21天直接固定染色,计数转化灶个数.H2O2组：细胞接种后培养至第19天时,添加H2 O2处理24 h,CCK-8染色并测定A450nm值,计算细胞转化率.比较两种方法的相关性.2)通过细胞生长试验选择适宜的染料木黄酮和葛根素浓度进行细胞转化实验,H2O2法判定转化实验结果.结果 1)细胞灶法：启动实验阳性对照3-甲基胆蒽(3-MCA)组每板有53个孔含有转化灶,阴性对照组每板有13个.促癌实验阳性对照佛波醇12-十四酸13-乙酸酯(TPA)组每板有40个孔含有转化灶,阴性对照组每板有18个.转化灶个数分别通过卡方检验,P值均小于0.01,有显著差异.H2O2法：启动实验3-MCA组每板有40个孔含有转化灶,阴性对照组每板有12个.促癌实验TPA组每板有50个孔含有转化灶,阴性对照组每板有15个.卡方检验P值均小于0.01,阳性组相对于阴性组有显著差异.450 nm下测得的A值通过t检验也有显著差异.2)在启动实验中,染料木黄酮和葛根素各浓度组相对于阴性组均无显著性差异,为阴性结果.而促癌实验染料木黄酮浓度为0.03,1和3 mg· L-1时的A值相对对照组有显著差异,表现为阳性结果.葛根素浓度为3 mg·L-1时的A值相对对照组有显著差异,表现为可疑(equivocal).结论 H2O2法判定结果的可靠性,Bhas 42细胞转化实验高通量检测方法可用于药物非遗传毒性致癌物和遗传毒性致癌物的早期筛选.染料木黄酮在本实验条件下,促癌实验呈阳性结果,但启动实验呈阴性结果,提示其具有非遗传毒性致癌性；葛根素在促癌实验中为可疑结果,提示其可能具有非遗传毒性致癌性.
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