目的:筛选人基因MDC1蛋白低表达的稳定转染细胞株,为进一步探讨MDC1基因的蛋白表达与食管癌ECA109细胞放射敏感性的关系提供条件。方法:根据MDC1 mRNA序列,选择三个19nts的靶序列,设计并合成包含正、反义序列的互补DNA链,同时设计一个无义对照序列。与pSIH1载体构建重组表达载体pSIH1-MDC1-shRNA1、pSIH1-MDC1-shRNA2、pSIH1-MDC1-shRNA3和pSIH1-negative;对重组载体进行酶切和测序鉴定。转染ECA109细胞,采用Real-Time PCR的方法检测MDC1 mRNA,将干扰效果最好的质粒与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,采用Real-Time PCR和western blotting测定MDC1在mRNA和蛋白水平的表达。结果:①成功地将MDC1shRNA与pSIH1-H1-copGFP质粒连接;②pSIH1-MDC1-shRNA1、pSIH1-MDC1-shRNA2、pSIH1-MDC1-shRNA3转染ECA109细胞后,其mRNA表达水平较空白对照组分别下降了68%、78%、61%;③成功筛选出基因MDC1蛋白低表达的食管癌稳定转染细胞株;④稳转细胞株中基因MDC1在mRNA和蛋白水平上分别下降了66%和58%。结论:成功构建MDC1shRNA表达载体并成功筛选出基因MDC1蛋白低表达的食管癌稳转细胞株。