2型猪链球菌毒力因子gapdh基因的克隆、表达及细胞互作蛋白的初步寻找

来源 :第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjxff520
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2型猪链球菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是一种糖分解酶,负责将磷酸甘油醛GAP磷酸化产生1,3-二磷酸甘油酯DPG,通常存在于细菌胞浆中。细菌表面的多功能GAPDH蛋白可能与细菌毒力密切相关。 本研究以2005年四川分离的2型猪链球菌(SC19)基因组为模板,利用PCR扩增gapdh基因,扩增片段大小为1011 bp。构建了表达质粒pET-gapdh,并成功在大肠杆菌BL21中表达,大小约为41 kDa的融合蛋白GAPDH,与预期结果相符。通过Western blot检测,证实GAPDH具有良好的免疫学活性。应用纯化的GAPDH蛋白,制备了兔抗GAPDH蛋白的多克隆抗体。HeLa细胞是2型猪链球菌感染的模型细胞之一,因此,本研究提取了HeLa细胞的总蛋白,运用配体重叠技术(ligand-ovcrlay approach),初步寻找到了一个可能与GAPDH蛋白作用的受体蛋白,为进一步研究2型猪链球菌的分子致病机理奠定了的基础。
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