【摘 要】
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制备无色孔雀石绿(LMG)单克隆抗体,并分析其生物学特性,为建立LMG残留的免疫学检测方法奠定基础.通过改进的碳二亚胺法制备无色孔雀石绿-牛血清白蛋白偶联物(LMG-BSA)与
【机 构】
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上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海201306
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制备无色孔雀石绿(LMG)单克隆抗体,并分析其生物学特性,为建立LMG残留的免疫学检测方法奠定基础.通过改进的碳二亚胺法制备无色孔雀石绿-牛血清白蛋白偶联物(LMG-BSA)与副品红-牛血清白蛋白偶联物(PA-BSA),用紫外扫描、质谱法方法鉴定偶联物.利用制备的LMG-BSA偶联物与PA-BSA偶联物作为免疫原,免疫4～5周龄Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备LMG单克隆抗体,并对其效价、亲和力、灵敏度和特异性等进行鉴定.LMG-BSA与PA-BSA的偶联比分别为7∶1和37∶1；经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,由以上两种抗原各获得1株杂交瘤细胞,分别命名为L-1、P-1.这2株细胞株分泌的单克隆抗体经纯化后,经测定效价分别为1.25×105和6.25×106,亲和力常数分别为4.92×109和1.44× 108 L/mol,对2株抗体进行竞争抑制测定,其IC50分别可以达到8.03和10.5μg/L.L-1分泌的单克隆抗体仅与孔雀石绿存在交叉反应,交叉反应率为100％； P-1分泌的单克隆抗体与孔雀石绿及副品红均存在交叉反应,交叉反应率分别为80％与100％.
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