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目的：探讨骨髓源神经祖细胞(BM-NPCs)向神经元诱导分化的能力.
方法：将BM-MSCs获得的第3代BM-NPCs置于神经元细胞培养基中贴壁诱导观察15d.通过细胞免疫荧光技术分析诱导细胞神经元标志物Tuj-1/NF200和神经胶质细胞标志物GFAP/S100的表达情况,用半定量RT-PCR与定量qPCR检测mRNA水平,诱导前后神经干细胞标志物Nestin/NCAM1/CD133基因,神经细胞基因β-Ⅲ-tubulin/NeuN/5-HT/ACHE/GABA和CNPase,以及神经营养因子NGF/BDNF/GDNF基因表达情况.另外,将CM-Dil细胞示踪剂标记后的第3代BM-NPCs与原代皮层神经元细胞共培养15d,利用倒置显微镜和细胞免疫荧光法观察检测神经元标志物Tuj-1表达情况.
结果：BM-NPCs直接贴壁诱导的骨髓源神经细胞,可见较典型的神经样细胞形态,表达部分神经细胞表型Tuj-1(+)/NF200(-)和GFAP(+)/S100(+),以及表达β-Ⅲ-tubulin(+)/NeuN/5-HT(+)/ACHE(+)/GABA(-)和CNPase(++)/NGF(+++)/BDNF(+)/GDNF(+)基因特点.定量基因表达检测发现,BM-NPCs较BM-MSCs高表达NCAM1和CD133神经祖细胞基因,贴壁分化后干细胞基因Nestin、NCAM1、CD133表达明显下降,随着细胞分化成不同的神经样细胞,β-Ⅲ-tubulin/NeuN/5-HT/ACHE基因表达下调,培养后期CNPase表达明显升高,NGF基因水平的显著提高.将CM-Dil标记BM-NPCs与原代皮层神经元细胞共培养,可见BM-NPCs可分化成较多典型神经元样形态特征、Tuj1荧光蛋白呈阳性表达,与正常神经细胞相互连接成网络状生长.
结论：骨髓源性神经元样细胞与完全成熟神经元相比细胞形态相似,但基因表达上仍存在一定差距,BM-NPCs较BM-MSCs更具有向神经细胞分化的能力,BM-NPCs在合适的环境中有能力向功能性神经元分化.