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目的：构建BCR-ABL融合基因激酶区T315I突变型和野生型质粒.材料和方法：一、材料：血液标本为在我院确诊的CML患者伊马替尼治疗2年后发生耐药，经基因测序证实存在T315I点突变的患者外周血.二、方法：1.取患者血液标本通过分离白细胞提取RNA；2.应用第一链cDNA合成试剂盒对RNA逆转录获得cDNA；3.针对T315I突变区域设计特定PCR引物，通过PCR反应大量扩增目的DNA片段；4、应用T4DNA连接酶将目标片段与pGEM-T质粒载体进行连接；5.应用细菌转化技术将目标转入JM109感受态大肠杆菌，在含氨苄青霉素的LB培养液中培养大肠杆菌后在含氨苄青霉素、IPTG和X-gal的LB平板上培养；6.含有重组质粒的转化子在具有生色诱导的培养基上只能形成白色菌落，通过蓝白筛选挑选单克隆菌落；7.将挑取的单克隆菌落在含氨苄青霉素的LB培养液中增殖大量复制转化质粒；8.用质粒抽取试剂盒提取培养后的菌液质粒；9.将对应菌落所得的菌落送生物测序公司，应用质粒测序技术检测单克隆菌落转化后质粒DNA序列；10.挑取存在T315I点突变的质粒和野生型菌落再次培养后提取制备大量质粒.