【摘 要】
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利用抗大豆胰蛋白酶抑制剂(Sovbean Trypsin Inhibitor,STI)的单克隆抗体建立免疫检测方法,实现对鱼糜制品中大豆蛋白的检测。首先采用等电点沉淀、硫酸铵盐析、离子交换柱层
【机 构】
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集美大学生物工程学院; 福建省水产品深加工工程研究中心;
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利用抗大豆胰蛋白酶抑制剂(Sovbean Trypsin Inhibitor,STI)的单克隆抗体建立免疫检测方法,实现对鱼糜制品中大豆蛋白的检测。首先采用等电点沉淀、硫酸铵盐析、离子交换柱层析等方法纯化STI。利用纯化的STI制备抗STI单克隆抗体,以Protein G Sepharose亲和层析柱纯化抗体,采用SDS-PAGE及Western blot法分别对其进行纯度及特异性分析。利用制备的单克隆抗体,通过Western blot及光密度分析法对鱼糜制品中的大豆蛋白进行半定量分析。结果表明,制备的抗STI单克隆抗体特异性良好,只与大豆分离蛋白中的STI反应。以抗STI单克隆抗体建立的Western blot法最低检测限为0.005%(w/w)大豆蛋白添加量的鱼糜制品。利用该方法检测5种市售鱼九及7种原料鱼浆,发现4种鱼九及3种鱼浆中大豆蛋白的添加量在1%左右,而鱼板中大豆蛋白的添加量则超过2%,另4种鱼浆中未检测出大豆蛋白。说明本研究建立的STI免疫检测方法可实现对鱼糜制品中的大豆蛋白的半定量检测,具有实际应用价值。
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