MLPA技术检测22q11.2染色体微缺失

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目的:22号染色体长臂近端22q11.2-22q11.3片段微缺失引起的22q11.2缺失综合征是人类最常见的基因疾病之一。22q11.2微缺失在心脏椎体干表型(OMIM 217095),腭心面综合征(OMIM 125520),Digeorge综合征(OMIM 188400)发生率较高。综合征的表型变异谱广泛。临床表现错综复杂,主要包括心脏锥体和主动脉畸形,颅面发育畸形,腺体(胸腺,甲状旁腺)异常,以及行为异常等。尽管文献报道90%的患者都有3Mb大小的典型缺失区域,但目前临床主要根据表型来诊断,微缺失的具体类型并不清楚。文献提示患者的临床表型多样且缺失片段与临床表型并无直接关系。材料和方法:多重连接依赖性探针扩增技术(Multiplex ligation dependent probe amplification,MLPA)是一种非常有效地检测基因拷贝数的技术,比FISH更简单、快速、经济。不仅可以诊断单倍体缺失,而且可以确定区域的大小。我们采用MLPA试剂盒(P250),检测32例VCFS散发核心家系,45例复杂先心病例(包括VSD,ASD,TOF,PDA等)和一个怀疑为VCFS的家系先证者。结果:32例临床诊断为VCFS的散发病例中,VCFS组的32例患者28例存在典型3M缺失位点,定位基因呈现复杂性表现;3例为1.5M缺失类型,一例未发现缺失。先心病组45例为复杂先心病发现28(62%)微缺失。VCFS组与先心病组患者缺失基因类型有所不同,特别是NKFZp566几乎都减少,除了一例病人之外(30/31)。AI651963在两组中表现为明显差异,VCFS组增高2倍(26/30),而在先心病组中并无此表现(0/28)。TBX1呈现在172,301位置为双向性变化,其变化倍数为0.5,1,1.5,2,3倍,表明TBX1为复制或缺失类型存在于不同患者,提示TBX1是综合征的候选基因之一。怀疑为VCFS家系患者未发现微缺失情况。针对某一基因(TBX1和AI651936等)特征性变化,需要更多标本的支持,以及PCR方法的验证。结论:22q11微缺失是一种常染色体显性遗传病,微缺失患者其下一代发病率高,表型更加严重。由于目前没有推广基因诊断,不利于遗传咨询和优生。因此,杜宇曾经有22q11微缺失综合征孕产史的夫妇、自身为22q11微缺失患者的夫妇或者宫内检测胎儿为心脏锥体干畸形的夫妇,有必要推广产前基因诊断,检测胎儿的微缺失;MLPA可以取代FISH进行22q微缺失或微重复的一种诊断手段。
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